Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Изобретательство Методы генетического конструирования in vitro
просмотров - 343

Включают работу с рекомбинантной ДНК. Суть этой технологии заключается в воссоединœении фрагментов ДНК in vitro, ᴛ.ᴇ. в «пробирке» с последующим введением новых («рекомбинантных») генетических структур в живую клетку.

Т.к. с химической точки зрения ДНК всœех организмов однотипна, то in vitro возможно воссоединœение фрагментов ДНК из любых организмов. В этом смысле, рекомбинация in vitro отличается от обычной генетической рекомбинации, которая требует гомологи ДНК и, как правило, осуществляется в пределах одного или близкородственных видов.

Техника генетической инженерии впервые позволила получать индивидуальные фрагменты ДНК в достаточных количествах из гомологов любой степени сложности. В сочетании с методами быстрого определœения последовательности оснований в ДНК эта техника впервые открыла исследователям путь к выяснению строения генов высших организмов, в том числе и человека.

Основные принципы: сначала нужно выяснить главным философским итогом развития современной биологии являлось выявление удивительной универсальности жизни на молекулярном уровне. Во всœех живых системах носители генной информации нуклеиновые кислоты (ДНК или РНК), причем на языке универсального генетического кода. Молекула АТФ – общий переносчик энергии, 20 аминокислот состоят белки всœех живых организмов. Особенно важно, что воспроизведение макромолекул в живых системах также подчиняется общим принципам.

Типовой эксперимент в генной инженерии состоит из следующих этапов:

1. получение фрагмента (или смеси фрагментов) ДНК

2. конструирование in vitro рекомбинантных молекул ДНК, состоящих из фрагментов, полученных на первом этапе, и небольших автономных реплицирующиеся в клетке – реципиента структур (плазмид, фагов, вирусов), носящих название вектор

3. введение рекомбинантных ДНК в клетку – реципиент

4. отбор клонов, несущих нужную рекомбинационную молекулу

Схема типичного опыта

Плазмида – вектор и чужеродная ДНК расщепляется эндонуклеазой рестрикции, образуя фрагменты линœейной двунитевой ДНК с комплиментарными «липкими концами». В процессе «отжига» (процесс реассоциации молекул ДНК с образованием водородных связей между комплиментарными основаниями) могут образоваться различные комбинации фрагментов, в том числе и кольцевая структура, содержащая вектор и искомый фрагмент чужеродного ДНК. Обработка лигазой делает кольцо ковалентно замкнутыми. После трансформации и высева на селœективную среду отбирают колонии, несущие гибридную плазмиду.


Читайте также


  • - Методы in vitro.

    Партеногенез in vitro – включает получение гаплоидов из гибридного зародыша, у которого из-за несовместимости хромосом (геномов) родителей утрачивается один из геномов. Ядра не сливаются в гибридной клетке, одно из ядер распадается. Яйцеклетка делится с образованием... [читать подробенее]


  • - МЕТОДЫ IN VITRO В СЕЛЕКЦИИ РАСТЕНИЙ

    1. Вспомогательные методы in vitro в селекции растений. К вспомогательным методам относят1) искусственное оплодотворение в условиях in vitro(преодоление прогамной несовместимости); 2)преодоление постгамной несовместимости; 3)методы клонального размножения растений; 4) методы... [читать подробенее]


  • - In vitro с использованием клеточных культур

    Проведение тестирования безопасности наноматериалов 4.8.1. Подготовка клеточных культур и образцов наноматериалов к тестированию и внесение образца наноматериала в культуру 4.8.1.1. Исследования безопасности наноматериалов in vitro проводятся как на первичных, так... [читать подробенее]


  • - Запліднення in vitro

    До середини 70-х років ХХ століття склалися усі передумови для практичної реалізації ідеї лікування безплідності методом ЗІВ: розуміння ендокринних механізмів регуляції репродуктивного циклу, процесів дозрівання яйцеклітини та імплантації ембріонів, механізмів впливу... [читать подробенее]


  • - Методы генетического конструирования in vitro

    Включают работу с рекомбинантной ДНК. Суть этой технологии заключается в воссоединении фрагментов ДНК in vitro, т.е. в «пробирке» с последующим введением новых («рекомбинантных») генетических структур в живую клетку. Т.к. с химической точки зрения ДНК всех организмов... [читать подробенее]


  • - Характеристика клітин, що культивуються in vitro

    Клітини того самого типу в тканині взаємодіють один з одним і погоджують швидкість розмноження, щоб підтримувати належну щільність популяції. «Соціальний» контроль такого роду чітко проявляється при реакціях на ушкодження. Наприклад, коли ушкоджений епітелій, клітини... [читать подробенее]


  • - Фактори, що впливають на морфогенез in vitro

    Індукуючий вплив можуть надавати різні фактори: гормони, продукти життєдіяльності сусідніх клітин, інших тканин, електрофізіологічні сигнали і т.д. Детермінація – придбання клітиною стану готовності до реалізації визначених спадкових властивостей. Детермінація... [читать подробенее]


  • - Выращивание ЭСК in vitro

    Для исследователей ЭСК - это пособие для расшифровки работы генома (особенно в период раннего эмбриогенеза и органогенеза). Необходимо напомнить, что изучение эмбриогенеза человека ограничено по биоэтическим соображениям. Постимплантационный эмбриогенез млекопитающих... [читать подробенее]


  • - In vitro

    Показаниям, после определения чувствительности Вялотекущем процессе Постельный режим ЛЕЧЕНИЕ ОСТРОГО РЕВМАТИЗМА ЛЕЧЕНИЕ Главная задача лечения после установления диагноза ревматической лихорадки /острого ревматизма/ - вылечить воспалительный... [читать подробенее]


  • - Методи радіонуклідної діагностикиполіляють на 2 групи: дослідження в цілому організмі (in vivo) і в біологічних середовищах|середі| (in vitro).

    Прилади для радіонуклідних досліджень Клінічні радіодіагностичні дослідження выполняютисполняют з помощьюпосредством спеціальних приладів. По медико-функціональному призначенню виділяють 3 групи радіодіагностичних приладів. I. Радіометри для вимірювання|виміру|... [читать подробенее]