Категории
Биотехнологии 
Методы розеткообразования просмотров - 1025
Это первые методы, позволившие иммунологам определить содержание Т- и В-лимфоцитов человека в период, когда отсутствовали необходимые моноклональные антитела для выявления этих клеток. Но тем не менее эти методы все еще находят применение в диагностических целях.
Метод спонтанного розеткообразования основан на том, что на поверхности всех Т-лимфоцитов человека содержится белок-рецептор для бараньих эритроцитов. На В-лимфоцитах таких рецепторов нет. Инкубируя взвесь лимфоцитов периферической крови с бараньими эритроцитами, получают структуры, называемые “розетками”: в центре Т-лимфоцит, по периферии – прикрепленные к его поверхности бараньи эритроциты. Т-лимфоциты, выявляемые с помощью этого теста͵ обозначают еще Е-РОК (где Е-эритроцит барана, РОК – розеткообразующая клетка). Позднее было установлено, что рецептором к бараньим эритроцитам является белок CD2 – общий маркер всех Т-лимфоцитов человека.
Таблица 26. Ориентировочный набор современных методов оценки врожденного и адаптивного иммунитета
| Методы оценки состояния врожденного иммунитета | Методы оценки состояния адаптивного иммунитета | ||
| Количественные | качественные | количественные | качественные |
| 1. Проточная цитометрия (выявление количества определенных клеток врожденной иммунной системы) | 1. определение фагоцитар-ного индекса 2. определение фагоцитарного числа 3. НСТ-тест 4. ИФА (определение цитокинов, хемокинов, компонентов комплемента и т.д.) | 1. Проточная цитофлуори-метрия (определение попу-ляций и субпопуляций лим-фоцитов) 2. Иммунофлуоресцентный метод (определение поверх-ностных иммуноглобулинов и субпопуляций лимфоци-тов с помощью люминес-центной микроскопии) 3.Методы розеткообразова-ния (определение содержа-ния Т- и В-лимфоцитов: Е-РОК, м-РОК, ЕА-РОК, ЕАС-РОК) | 1. Проточная цитофлуори-метрия (определение экс-прессии рецепторов для ци-токинов и других рецепто-ров на различных субпопу-ляциях лимфоцитов и др.) 2. РБТЛ (реакция бластной трансформации лимфоци-тов) 3. РТМЛ (реакция торможе-ния миграции лейкоцитов) 4. ИФА (определение сыво-роточных и секреторных иммуноглобулинов, уровня цитокинов, растворимых рецепторов для цитокинов и др.) 5. кожные пробы 6. РАСТ (радиоаллергосор-бентный тест) |
Аналогичный метод применяется при оценке количества В-лимфоцитов, в нем используется взаимодействие эритроцитов, нагруженных антителами к этим эритроцитам, с Fc-рецепторами В-лимфоцитов (ЕА-розетки: эритроциты, антитела).
Используют также метод ЕАС-розеткообразования (эритроциты, антитела и комплемент). В этом случае бычьи эритроциты, соединенные с антителами и комплементом, способны взаимодействовать с Fc- и С3- рецепторами В-лимфоцитов, также формируя розетки. Схематически тесты розеткообразования представлены на рис. 52.
| 
|
Рисунок 52. Методы розеткообразования (слева – Е-РОК,
справа – ЕА-РОК)
Недостатки этих методов: неоднозначность трактовки результатов (они зависят от условий постановки реакций, качества реагентов, определяются состоянием не только маркерных молекул, но и цитоскелета и др.), трудности, связанные с их стандартизацией и автоматизацией.