Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Биотехнологии С использованием C1q
просмотров - 192

Постановка метода. При отборе проб крови крайне важно соблюдать ряд предосторожностей, поскольку связанные иммунные комплексы при образовании сгустка легко высвобождаются под действием фактора I. Чтобы избежать этого, следует быстро отделять эритроциты от плазмы.

Для идентификации средних и крупных комплексов, содержащих антитела IgG, часто используют осаждение иммунных комплексов раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ 6000) в 0,1м натрий-боратном буфере pH 8,4 с последующим определœением IgG в осадке. Рабочую смесь готовят из расчета 100 мкл сыворотки крови больного и 200 мкл буфера. К 0,9 мл раствора ПЭГ добавляют 100 мкл рабочей смеси, в пробирку контроля к 100 мкл рабочей смеси добавляют 0,9 буфера. Обе пробирки выдерживают 1 час при комнатной температуре с последующей спектрофотометрией на СФ 26 при длинœе волны 450 нм. Количество ЦИК определяют по разнице оптической плотности по сравнению с контролем и выражают в условных единицах. На этом принципе основан ряд коммерческих систем определœения иммунных комплексов.

Определœение содержания цитокинов в сыворотке крови

Важной функцией моноцитов и лимфоцитов крови являются продукция и секреция цитокинов. Цитокины это регуляторные белки иммунной системы, играющие критическую роль в межклеточных коммуникациях и опосредующие ряд биологических функций, таких как рост и дифференцировка клеток в гемопоэзе, эффекторные и регуляторные функции иммунокомпетентных клеток.

На сегодняшний день наиболее оптимальными для оценки уровней цитокинов являются иммуноферментные методы. Применение диагностических иммуноферментных тест-систем для оценки цитокинового статуса как на местном, так и на системном уровнях при различных патологиях является существенным, позволяя углубить понимание патогенеза заболеваний. Оценка способности лимфоцитов и моноцитов крови продуцировать цитокины (интерлейкины, интерфероны) в последнее время всœе чаще используется для проверки их функциональной полноценности.

IL-2. Содержание в культуральных жидкостях и сыворотке крови определяется в интервале концентраций от 20 до 1000 пг/мл (1пг=10-12г). IL-2 представляет собой гликопротеин, синтезируемый Т-лимфоцитами при активации митогенами или антигенами. IL-2 играет ключевую роль в развитии иммунного ответа. Низкий уровень IL-2 наблюдается при целом ряде заболеваний: злокачественных опухолях, рассеянном склерозе, склеродермии, ревматоидных артритах, инсулинозависимом диабете, СКВ и др.

IL-1-bопределяется в образцах сыворотки и культуральных жидкостях в диапазоне концентраций от 6,3 до 400 пкг/мл. Основными источниками IL-1b являются моноциты, макрофаги и дендритные клетки. В отличие от IL-1a, IL-1b представлен в виде растворимой формы. Благодаря выраженным иммуномодулирующим свойствам рекомбинантная форма IL-1b применяется в клинической практике для лечения иммунодефицитов и восстановления гемопоэза.

RAIL-1(рецепторный антагонист IL-1). Содержание в сыворотке здоровых доноров варьирует от 350 до 700 пг/мл. Продуцируется макрофагами, моноцитами, нейтрофилами, фибробластами и эпителиальными клетками. RAIL-1 подавляет биологическую активность IL-1a и IL-1b, конкурируя с ними за связывание с рецепторами. Определœение концентрации RAIL-1 в крови человека может иметь диагностическое и прогностическое значение при сепсисе, ревматоидном артрите, астме и воспалительных заболеваниях.

IL-4 продуцируется активированными Т-лимфоцитами. IL-4 стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов, костномозговых клеток - предшественников и тучных клеток. IL-4 вызывает экспрессию ряда поверхностных антигенов и стимулирует продукцию цитофильных иммуноглобулинов. Его многочисленные биологические функции включают индукцию переключения продукции иммуноглобулинов плазматическими клетками на продукцию IgE и стимуляцию субпопуляции Т-хелперов Th2, которые регулируют гуморальный иммунный ответ. IL-4 также обладает выраженной противоопухолевой активностью.

IL-8 продуцируется мононуклеарными фагоцитами, полиморфноядерными лейкоцитами, эндотелиальными клетками и разнообразными мезотелиальными типами клеток в ответ на различные стимулы, включая эндотоксин, IL-1, TNF-a и вирусы. Первичная функция IL-8 - активация и хемотаксис нейтрофилов к месту воспаления. Сегодня проходят испытания препаратов для лечения ран на основе IL-8.

IFN-αявляется одним из ключевых элементов неспецифической защиты организма от вирусных инфекций. IFN-αсинтезируется клетками моноцитарно-макрофагального ряда. Практически всœе типы клеток при должной стимуляции могут стать продуцентами IFN-a, однако максимальные количества IFN-a продуцируют предшественники дендритных клеток. В норме уровень альфа-интерферона в сыворотке крови незначителœен и составляет всœего несколько единиц: 5-50 пкг на 1 мл сыворотки. Основными индукторами синтеза IFN-a являются большинство вирусов и их продуктов, среди которых ведущее место занимает двухцепочечная РНК. Биологические функции IFN-a направлены на подавление вирусной инфекции и опухолевого роста. Препараты на основе IFN-a активно используются в клинической практике.

IFN-gпродуцируется Т-лимфоцитами и натуральными киллерами. Стимулирует in vitro и in vivo антимикробную и противоопухолевую активность макрофагов, а также натуральных киллеров. IFN-g стимулирует экспрессию молекул МНС класса II, является кофактором дифференцировки и активации В-клеток и функциональным антагонистом IL-4.

TNF-a. Макрофаги выступают основными продуцентами TNF-a в ответ на многочисленные стимулы: митогены, цитокины, бактерии, вирусы и паразиты. Несмотря на противоопухолевую активность, TNF-a играет большую роль в модуляции иммунного ответа͵ воспаления и гемопоэза; принимает участие в противоопухолевом иммунитете, а при избыточной продукции вызывает анорексию, кахексию и септический шок.


Читайте также


  • - Таксация лесосек с использованием материалов лесоустройства

    Круговые реласкопические площадки Круговые площадки постоянного радиуса Сплошной перечет Способы таксации лесосек 1 Виды учёта древесины3 Ленточный перечёт 1 Виды учёта древесины Учет древесины, отпускаемой на корню, в зависимости от... [читать подробенее]


  • - Приобретение жилых помещений с использованием средств материнского капитала - новое в практике применения

    29 декабря 2006 года был принят Федеральный закон «О дополнительных мерах государственной поддержки семей, имеющих детей» (далее – №256-ФЗ), вступивший в силу 1 января 2007 года. Одной из таких мер является право на использование материнского капитала. Материнский (семейный)... [читать подробенее]


  • - Определение места судна с использованием глобальных спутниковых навигационных систем

    16.1 Структура глобальных навигационных спутниковых систем 16.1.1.Общие сведения Глобальная навигационная спутниковая система ГНСС предназначена для высокоточного определения координат места подвижных объектов, их курса и скорости. В настоящее время навигационные... [читать подробенее]


  • - Случайный мутагенез с использованием аналогов нуклеотидов.

    Ген-мишень встраивают в плазмиду поблизости от двух тесно расположенных сайтов рестрикции. Эти сайты подбирают так, чтобы после расщепления двумя рестриктазами образовывались укороченные 3’ и 5’-концы, а именно, чтобы 3’-конец сайта расщепления, расположенного рядом с... [читать подробенее]


  • - Олигонуклеотид-направленный мутагенез с использованием плазмидной ДНК.

    Основной недостаток олигонуклеотид-направленного мутагенеза с использованием фага М13 – большое число процедур. Чтобы выделить мутантную форму нужного гена, приходится затратить много времени. В качестве альтернативы было разработано множество других подходов,... [читать подробенее]


  • - Олигонуклеотид-направленный мутагенез с использованием ДНК фага М13.

    Сайт-специфический мутагенез. Локализованный мутагенез. В наиболее простом варианте клонированный фрагмент ДНК, ограниченный удобными сайтами рестрикции, может быть выделен и подвергнут мутагенезу in vitro. Вследствие проведения реакции in vitro доза мутагена может... [читать подробенее]


  • - Вопрос № 4. Композиции с использованием природных материалов

    Вопрос № 3. Подвесные композиции Для их создания используют подвесные ёмкости. Если это корзина, то растения сначала высаживаются в водонепроницаемый контейнер, который затем уже помещается в корзину. Если это кашпо с поддоном – возможно высаживание растения прямо в... [читать подробенее]


  • - In vitro с использованием клеточных культур

    Проведение тестирования безопасности наноматериалов 4.8.1. Подготовка клеточных культур и образцов наноматериалов к тестированию и внесение образца наноматериала в культуру 4.8.1.1. Исследования безопасности наноматериалов in vitro проводятся как на первичных, так... [читать подробенее]


  • - С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ Определение группы крови можно произвести с помощью моноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны анти-А и анти-В. Получают моноклональные антитела с... [читать подробенее]


  • - Синтезы с использованием диазопроизводных

    Восстановление галогенпроизводных водородом на катализаторах или натрием в спирте 8.3.5 Реакция Кольбе Электролиз водно-спиртовых растворов солей органических кислот Анод: Образуются алканы с удвоенным количеством атомов углерода. 8.4 Реакции алканов ... [читать подробенее]