Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Биотехнологии Современные методы определения количества лимфоцитов
просмотров - 220

Сегодня для определœения разных популяций и субпопуляций лимфоцитов крови используется реакция иммунофлуоресценции,или иммунофлуоресцентный метод.

Иммунофлуоресцентный метод позволяет идентифицировать различные клеточные популяции, несущие специфические поверхностные антигены (CD-антигены – от англ. – Clasters of differentiation) и соответственно этому окрашенные различными флуоресцентно меченными моноклональными антителами.

Принцип этого метода заключается в идентификации дифференцировочных маркерных антигенов на поверхности клеток (в большинстве случаев – на лимфоцитах). Для определœения поверхностных маркеров в суспензию клеток добавляют моноклональные антитела против CD-антигенов клетки, меченные ФИТЦ (флуоресцеин-изотиоцианатом), дающим зелœеную флуоресценцию, или меченные ТРИЦ (тетраметилрома-дин-изотиоцианат) или фикоэритрином, дающими красное свечение. Окрашенные клетки анализируют на проточном цитофлуориметре или просматривают с помощью флуоресцентного микроскопа. При проточной цитофлуориметрии поток клеток проходит через тончайший капилляр, на который падает возбуждающий люминœесценцию луч света. Каждая светящаяся клетка регистрируется специальным детектором в виде импульса. Прибор автоматически обрабатывает информацию и выдает результаты в виде гистограммы - графика распределœения клеток с разной интенсивностью свечения (рис. 53).

Для просматривания под флуоресцентным микроскопом суспензию клеток переносят на предметное стекло, высушивают, наносят иммерсионное масло и смотрят препарат под объективом х90. Наблюдение следует проводить в затемненном помещении.

Иммунофлуоресцентные методы также используются для обнаружения аутоантител и антител к тканевым и клеточным антигенам в сыворотках пациентов с аутоиммунными заболеваниями.

Рисунок 53. Проточная цитофлуориметрия

Используя широкий набор моноклональных антител, можно определить количественное содержание в крови не только Т- (CD2+, CD3+) и В-лимфоцитов (CD19+, CD20+, CD22+, CD72+), но и субпопуляций Т-лимфоцитов: Т-хелперов (CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) и NK – клеток (CD16+, CD56+).

Вместе с тем, с помощью данного метода можно определять наличие на клетках врожденной и адаптивной иммунной систем рецепторов к цитокинам, другим медиаторам, а также экспрессию на них активационных маркеров и молекул клеточной адгезии. Перечень некоторых МКАТ, детектирующих указанные клетки и структуры, приведен в табл. 27.

Таблица 27. Моноклональные антитела и детектируемые с их помощью клетки и структуры