Категории
Сегодня для определения разных популяций и субпопуляций лимфоцитов крови используется реакция иммунофлуоресценции,или иммунофлуоресцентный метод.
Иммунофлуоресцентный метод позволяет идентифицировать различные клеточные популяции, несущие специфические поверхностные антигены (CD-антигены – от англ. – Clasters of differentiation) и соответственно этому окрашенные различными флуоресцентно меченными моноклональными антителами.
Принцип этого метода заключается в идентификации дифференцировочных маркерных антигенов на поверхности клеток (в большинстве случаев – на лимфоцитах). Для определения поверхностных маркеров в суспензию клеток добавляют моноклональные антитела против CD-антигенов клетки, меченные ФИТЦ (флуоресцеин-изотиоцианатом), дающим зеленую флуоресценцию, или меченные ТРИЦ (тетраметилрома-дин-изотиоцианат) или фикоэритрином, дающими красное свечение. Окрашенные клетки анализируют на проточном цитофлуориметре или просматривают с помощью флуоресцентного микроскопа. При проточной цитофлуориметрии поток клеток проходит через тончайший капилляр, на который падает возбуждающий люминесценцию луч света. Каждая светящаяся клетка регистрируется специальным детектором в виде импульса. Прибор автоматически обрабатывает информацию и выдает результаты в виде гистограммы - графика распределения клеток с разной интенсивностью свечения (рис. 53).
Для просматривания под флуоресцентным микроскопом суспензию клеток переносят на предметное стекло, высушивают, наносят иммерсионное масло и смотрят препарат под объективом х90. Наблюдение следует проводить в затемненном помещении.
Иммунофлуоресцентные методы также используются для обнаружения аутоантител и антител к тканевым и клеточным антигенам в сыворотках пациентов с аутоиммунными заболеваниями.
Рисунок 53. Проточная цитофлуориметрия
Используя широкий набор моноклональных антител, можно определить количественное содержание в крови не только Т- (CD2+, CD3+) и В-лимфоцитов (CD19+, CD20+, CD22+, CD72+), но и субпопуляций Т-лимфоцитов: Т-хелперов (CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) и NK – клеток (CD16+, CD56+).
Вместе с тем, с помощью данного метода можно определять наличие на клетках врожденной и адаптивной иммунной систем рецепторов к цитокинам, другим медиаторам, а также экспрессию на них активационных маркеров и молекул клеточной адгезии. Перечень некоторых МКАТ, детектирующих указанные клетки и структуры, приведен в табл. 27.
Таблица 27. Моноклональные антитела и детектируемые с их помощью клетки и структуры