Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Биотехнологии Дополнительный материал к занятию
просмотров - 167

План изучения темы

1. Морфология, физиология и классификация вирусов.

2. Методы культивирования вирусов.

3. Методы обнаружения и идентификации вирусов.

4. Характеристика возбудителœей гриппа.

5. Методы диагностики гриппа; лечение и специфическая профилактика гриппа.

После изучения темы студент должен уметь

1. Исследовать в реакции гемагглютинации (РГА) полученную из заражённых куриных эмбрионов аллантоисную жидкость на присутствие вируса гриппа.

2. Учесть результаты идентификации выделœенного вируса гриппа в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Методы культивирования вирусов

Для культивирования вирусов используют следующие методы:

1) заражение животных (внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, интраназально, заражение в мозг и другие);

2) на куриных эмбрионах после заражения их на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную полость, в амниотическую полость, в желточный мешок;

3) на культуре клеток различных тканей.

Культура ткани - это клетки ткани, выращенные вне организма на специальной питательной среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняют присущий им обмен веществ и восприимчивость к определённым вирусам. Наиболее пригодными для культивирования вирусов являются клетки с быстрым ростом и высоким уровнем обмена веществ. По этой причинœе широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбрионов, клетки амниона человека и др.), а также культуры тканей опухолей. Выращивание клеток культур тканей производят в специальных флаконах (колбы-матрацы, флаконы Карреля и др.) и в пробирках. Культура клеток для роста должна иметь какую-либо опору, к примеру, пластинки стекла, стенку пробирки. В выросшую культуру ткани, которая покрывает стенку сосуда или пластинку стекла в виде однослойного клеточного пласта͵ засевают материал, содержащий вирус. Работу производят в стерильных условиях. Для подавления роста другой микрофлоры (кроме вирусов) вируссодержащий материал предварительно обрабатывают антибиотиками, чаще пенициллином и стрептомицином. Размножение вируса в клетках определяют по цитопатическому действию (ЦПД): в результате размножения вируса в клетках при микроскопии обнаруживаются включения, дегенеративные изменения и в конечном итоге клетки гибнут. Так как рост клеток прекращается, рН среды мало изменяется по сравнению с контролем (клетки без вируса). В связи с этим не изменяется и цвет среды. Питательной средой для культуры тканей бывают различные растворы, состав которых приближается к составу жидкостей организма (синтетическая среда 199, солевой раствор Хенкса с сывороткой, гидролизат лактальбумина с сывороткой и другие). Сегодня в вирусологической практике чаще всœего применяют свежие культуры клеток (первичные или первично-трипсинизированные) и перевиваемые культуры (линии) клеток.

Первично-трипсинизированные культуры клеток готовят из органов взрослых животных (чаще из почек обезьян и других животных) и эмбрионов человека, куриных фибробластов путём трипсинизации кусочков тканей с последующим культивированием клеток в питательной среде. С этой целью кусочки тканей измельчают ножницами (или другим способом), а затем промывают буферным раствором Хенкса для удаления клеток крови и обрабатывают 0,25-0,3% раствором трипсина. Трипсин разрушает межклеточные мостики и разъединяет клетки. С помощью камеры Горяева подсчитывают количество клеток, разводят до концентрации 400000 клеток в 1 мл. Полученную взвесь клеток разливают в пробирки, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и помещают в термостат при 370С в почти горизонтальном положении (под углом 50) в специальных штативах. Через 3-4 дня на стенке пробирки образуется сплошной слой размножившихся клеток. Пробирки с хорошим ростом ткани отбирают для заражения вирусом.

Перевиваемые культуры клеток (растущие) - ϶ᴛᴏ стабильные линии клеток, пассируемые вне организма в течение многих лет. Их получают из злокачественных опухолей и из нормальных (эмбриональных) тканей человека и животных. К ним относятся: 1) линия Неlа - клетки карциномы шейки матки человека; 2) линия Нер-2 – клетки злокачественной опухоли гортани человека; 3) линия Детройт-6 – клетки, выделœенные из костного мозга человека, больного раком лёгких; 4) линии А-0 и А-1 – клетки амниона человека; 5) линия СОЦ – клетки сердца обезьяны циномольгус и другие.

Полуперевиваемые или диплоидные культуры клеток - ϶ᴛᴏ клетки тканей человека, сохраняющие в процессе пассажей - до года - диплоидный набор хромосом. Диплоидные клетки человека не подвергаются злокачественному перерождению и этим выгодно отличаются от опухолевых.

Методы обнаружения вирусов в культуре ткани

Цитопатическое действие (ЦПД).

Реакция гемадсорбции.

Метод «цветных» проб.

Метод бляшек.

Иммунофлюоресцентный метод.

Реакция связывания комплемента.

Реакция гемагглютинации.

Реакция преципитации в агаре.

Заражение животных, восприимчивых к данному вирусу.


Читайте также


  • - Дополнительный материал к занятию.

    План изучения темы Исходный уровень знаний. Роль микробной флоры в развитии кариеса. Занятие 27 Цель самоподготовки. После самостоятельного изучения темы студент должен знать видовой состав микрофлоры, участвующей в формировании зубной бляшки; морфологию и... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию.

    План изучения темы. Исходный уровень знаний. Реакции иммунитета (окончание). Занятие 11 Цель самоподготовки. После самостоятельного изучения материала необходимо знать о каждой из реакций: - ингредиенты; - механизм реакции; - методы и схемы постановки; -... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию.

    План изучения темы. Исходный уровень знаний. К антибактериальным препаратам. Определение чувствительности микроорганизмов Химиотерапевтические препараты. Антибиотики. Занятие 14Цель самоподготовки. После самостоятельного изучения материала... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    Идентификация культур сальмонелл при помощи монорецепторных агглютинирующих сывороток После изучения морфологии и ферментативной активности культуры, выделенной от больного, для окончательной идентификации необходимо изучение её антигенных свойств путём... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний ЗАНЯТИЕ 35 ВОЗБУДИТЕЛИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ. ВОЗБУДИТЕЛИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ, ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ, ЛИХОРАДКИ ЭБОЛА В последние годы особенно широкое распространение получили ви- русные... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний Для усвоения материала темы необходимо знать: - выделение чистой культуры аэробов и анаэробов; - питательные среды. Цель занятия 1. Изучить принципы идентификации чистых культур по морфологическим, культуральным,... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний ЗАНЯТИЕ 34 ВОЗБУДИТЕЛИ ЭНТЕРОВИРУСНЫХ (ПОЛИОМЕЛИТА, КОКСАКИ, ЕСНО), НЕЙРОВИРУСНЫХ (БЕШЕНСТВА, ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ) ИНФЕКЦИЙ Благодаря достижениям медицинской науки, главным образом, разработке препаратов для... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний ЗАНЯТИЕ 6 ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ На предыдущих занятиях вы познакомились с морфологией и тинкториальными... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний Для усвоения материала темы необходимо знать: - морфологию и физиологию грибов и других продуцентов антибиотиков; - участие структурных элементов клеток прокариотов в их физиологических функциях; - состав и функции... [читать подробенее]


  • - Дополнительный материал к занятию

    План изучения темы Исходный уровень знаний ИНФЕКЦИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ ЗАНЯТИЕ 13 Освоение вопросов инфекции необходимо врачу для понимания патогенеза инфекционных заболеваний. Экспериментальный метод исследования в микробиологии... [читать подробенее]