Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Биология Методы in vitro.
просмотров - 541

Партеногенез in vitro – включает получение гаплоидов из гибридного зародыша, у которого из-за несовместимости хромосом (геномов) родителœей утрачивается один из геномов. Ядра не сливаются в гибридной клетке, одно из ядер распадается. Яйцеклетка делится с образованием зародыша, в котором отражаются признаки лишь одного генома.

Гиногенез – получение гаплоидных растений из изолированных семяпочек. Любая клетка зародышевого мешка с гаплоидным числом хромосом может индуцировать зародыш в условиях питательной среды.

Андрогенез – развитие зародыша и возникновение гаплоидных растений из незрелых пыльцевых зерен. Для эксперимента отбирают незрелую пыльцу, в которой не проходят митотические делœения, ᴛ.ᴇ. используют микроспоры сразу после мейоза

5) криосохранение растений. это сохранение клеток и тканей растений в жидком азоте при t – 1960 . при разработке технологий криосохранения предусматривают применение криопротекторов (веществ, способствующих сохранению целостности клеток при замораживании. Эти вещества используют при подготовке клеток и тканей к замораживанию и в момент замораживания) В качестве криопротекторов выступают осмотики (ПЭГ полиэтиленгликоль, Манит, сорбит) , может использоваться глицерин и другие полимерные соединœения. На подготовительном этапе выбирают мелкие клетки, которые культивируют в питательной среде с осмотиком. Осмотики отнимают свободную воду, что в значительной мере определяет судьбу клетки при замораживании. Клетки при культивировании насыщают аминокислотами, в частности пролином, который принимает участие в плотном связывании молекул воды. Особое внимание уделяют промежутку замораживания от 0 до -400 . Скорость замораживания обычно составляет 10С/мин. медленное замораживание и использование криопротекторов освобождает клетку от свободной воды, клетки полностью обезвоживаются, затем биоматериал погружают в жидкий азот. В случае если замораживание осуществляют медленно, то размораживание проводят как можно быстрее, ампулы помещают в водяную баню при t 400 , и выдерживают до полного исчезновения кристалликов льда. Жизнеспособность клеток выявляют с помощью витального окрашивания красителœем Эванса /мителœеновая синь. В случае если клетки живые, то они не окрашиваются красителœем, мертвые клетки впитывают краску как губка. Для определœения репродуктивного потенциала клеток, их высевают на агаризованную среду и наблюдают за появлением колоний.

5) Соматическая гибридизация – гибридизация соматических клеток (клеток тела), чаще всœего используется для получения отдаленных гибридов неполовым путем. Метод включает выделœение протопластов из экспланта или суспензионных культур(каллусных клеток); слияние протопластов; распознание и изолирование гетерокариоцитов, их культивирование; кареологический анализ клеточной популяции. На первом этапе с использованием ферментов (ксилоназа) разрушают клеточную оболочку, при этом клетка приобретает шарообразную форму, способность захватывать из окружающей среды отдельные органоиды, а также сливаться с себе подобными. Клетка без клеточной оболочки – протопласт. Протопласт может сохранять жизнеспособность в питательной среде, в которую внесены маннит или сорбит. Эти вещества поддерживают асматическое давление в клетке. Со временем протопласт может восстановить клеточную оболочку и дать начало клеточному клону.

После слияния протопластов возникает гетерокарион, при этом протопласты должны происходить от разных видов растений. В случае если протопласты происходят от одного вида растения возникает гомокарион.после восстановления клеточной оболочки возникают гетероциты и гомоциты, которые могут размножаться и формировать клеточные клоны. Из клеточных клонов гетерокариоцитов возникают отдаленные гибриды, или аллополиплоиды. Из клеточных клонов гомокариоиоцитов возникают автополиплоидные организмы. Для того, чтобы индентифицировать гетерокариоциты, можно использовать маркирование с помощью органоидов клетки.

Рис.1

Маркирование возможно и с помощью флуоресцентного окрашивания. Гибридные клетки гетерокариоциты изолируют в чашки Купрака с питательной средой. Питательная среда, в которой культивируют одиночные клетки, обогащена конденсирующим фактором. Конденсирующий фактор не может быть получен синтетическим путем, в связи с этим используют питательную среду, в которой ранее культивировали каллусные клетки. В течение 2-3 недель возникает клеточный клон, которые переносят на среду для каллусо-образования и продолжают дальнейшее культивирование. Через 2-4 недели часть клеток исследуют, распознавая кариотип, определяя происхождение хромосом и делают заключение о перспективности гибридной популяции. В случае если в процессе исследования выявляется сегрегация/ распад хромосом одного из геномов, то клеточную популяцию выбраковывают (данная комбинация геномов бесперспективна из-за несовместимости). Слияние протопластов возможно без воздействия индукторов, но эти события происходят редко. Протопласты имеют отрицательный заряд и отталкиваются друг от друга. Чтобы повысить вероятность слияния протопластов, в среду вносят асмотик ПЭГ, ионы кальция, при этом среда должна быть щелочной. В отличие от гибридов, цибриды содержат лишь одно ядро и гибридную цитоплазму. Метод цибридизации используется для передачи новому поколению клеток цитоплазматических признаков другого вида растения. В результате из таких клеток получают аналоги исходного вида, но с измененным качеством цитоплазмы. Так можно предвнести ДНК митохондрий, пластид свободной ДНК цитоплазмы, которые принимают участие в формировании фотосинтетических реакций, дыхательных процессов, формирование ответной реакции на патогены, химический, физический типы стресса в формировании репродуктивного потенциала.

Методы биотехнологии позволяют ускорить получение растений с признаком ЦМС (цитоплазматической стерильности), с признаками повышенной фотосинтетической активности ассимилирующего аппарата (площадь листовых пластинок).


Читайте также


  • - Методы определения и учета износа основных фондов.

    Любые объекты основных фондов подвержены физическому и моральному износу, т.е. под влиянием физических сил, техни­ческих и экономических факторов они постепенно утрачивают свои свойства, приходят в негодность и не могут далее выпол­нять свои функции. Физический износ... [читать подробенее]


  • - Методы палеогеографических исследований

    Палеогеографические методы можно разделить на аналитические (частные), поставляющие фактический материал, и синтетические (общие), базирующиеся на совокупности аналитических методов, но характеризующиеся определенным методическим приемом. К числу синтетических... [читать подробенее]


  • - Методы ГПП

    Предмет гражданского процесса Понятие процесса Тема №1: Понятие гражданского процесса Процесс — прежде всего, это деятельность, протяженная во времени. Гражданский же процесс — это совокупность процессуальных действий, совершаемых судом и участниками... [читать подробенее]


  • - Методы государственного регулирования

    Государство использует методы прямого и косвенного воздействия на экономику. Прямое воздействие предполагает использование административных методов. Косвенное — только экономических методов. Особенности административных методов: 1. они не связаны с созданием доп... [читать подробенее]


  • - Межличностные методы разрешения конфликтной ситуации.

    Процесс контроля. Лекция. 23.11.2010 К структурным методам разрешения конфликтов относятся следующие: · Разъяснения требований к работе. · Использование координационных и интеграционных механизмов, которые улучшают согласованность между подразделениями и... [читать подробенее]


  • - Методы палеогеографических исследований

    Предмет и задачи палеогеографии Как самостоятельное научное направление палеогеграфия офорляется в конце прошлого столетия. В виде сложившейся дисциплины - с середины нынешнего столетия, когда появились труды И.Н.Герасимова, К.К.Маркова, Л.Б.Рухина,... [читать подробенее]


  • - Методы начисления амортизации

    В целях бухгалтерского учета амортизацию основных средств и нематериальных активов предприятие может осуществлять одним из следующих способов: - линейный способ; - способ уменьшаемого остатка; - способ списания стоимости по сумме чисел лет срока полезного... [читать подробенее]


  • - Методы криминалистики

    Методология криминалистических исследований базируется на диалектическом подходе к материальной действительности. Фундаментальную роль в криминалистике играют положения диалектики о способности материи к отражению, о взаимосвязи и взаимообусловленности явлений, о... [читать подробенее]


  • - Методы и средства неразрушающего контроля качества работ по устройству оснований фундаментов при реконструкции зданий и подземных сооружений

    NN пп Метод контроля Контролируемый параметр Вид работ Нормативный документ   Радиоизотопный метод измерения плотности и влажности грунтов и бетонов (в поверхностном и глубинном вариантах) Плотность и влажность грунтов и материалов ... [читать подробенее]


  • - Методы по поводу обеспечения функционирования механизмов корпоративного управления и контроля в Кодексе корпоративного поведения.

    Аутсайдеры и эффективность Позитивное воздействие приватизационных процессов становится очевидным лишь при заметном увеличении доли аутсайдеров в структуре акционерного капитала предприятий. При увеличении доли иностранных инвесторов их позитивное воздействие... [читать подробенее]