Open Library - открытая библиотека учебной информации

Открытая библиотека для школьников и студентов. Лекции, конспекты и учебные материалы по всем научным направлениям.

Категории

Биология In vitro с использованием клеточных культур
просмотров - 296

Проведение тестирования безопасности наноматериалов

4.8.1. Подготовка клеточных культур и образцов наноматериалов к тестированию и внесение

образца наноматериала в культуру

4.8.1.1. Исследования безопасности наноматериалов in vitro проводятся как на первичных, так и

на перевиваемых клеточных культурах. В случае использования перевиваемых клеточных линий

допускается использование только стандартизированных культур, полученных из аккредитованных

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователœей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

источников.

4.8.1.2. В случае использования первичных клеточных культур они должны быть получены из

здоровых половозрелых животных, прошедших карантин в течение не менее 10 дней. Можно

использовать как линœейных (мыши линий CBA, C57B1/6 и др.), так и нелинœейных животных. В

случае использования линœейных животных крайне важно указать линию животных.

4.8.1.3. Для получения первичных клеточных культур используют стандартные методики,

рекомендованные для конкретного вида клеток и приведенные в разделœе 4.7.1.

4.8.1.4. Для унификации исследований первичные и перевиваемые

клеточные

культуры (в дальнейшем именуемые клетки-мишени) на

протяжении всœех

экспериментов культивируют в стандартных условиях (при 37 °C, 5% CO

и 95%

влажности), в стандартных питательных средах, которые

рекомендованы в

паспорте культуры для каждого конкретного вида клеток. Среды

стерилизуют

холодной фильтрацией через фильтры 0,22 микрон. При подготовке

перевиваемых

клеточных культур к экспериментам используют стандартную методику

пересева,

изложенную в разделœе 4.7.2.

4.8.1.5. Непосредственно перед экспериментом клетки стандартизируются по концентрации

(рекомендованной для конкретного метода и вида клеток) с помощью подсчета клеток в камере

Горяева с использованием 0,5% раствора трипанового синœего в ФСБ. Разброс по концентрации

клеток в сравниваемых группах не должен превышать +/- 10%. Количество повторов в группе

должно быть не менее 5, чтобы можно было оценить статистическую достоверность результатов.

4.8.1.6. Количество вносимого наноматериала рассчитывают на

куб. см

полной питательной среды. Для выражения количества наноматериала

используют

единицы массы наноматериала (мг). Дополнительно для выражения

количества

наноматериала можно использовать такие параметры, как число

частиц в

-3

единице объема питательной среды (см ) или общая площадь

поверхности

частиц в единице объема питательной среды (кв. м/куб. см).

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователœей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

4.8.1.7. Наноматериалы, предоставленные для тестирования в сухом виде (в виде порошков)

диспергируются в соответствующей питательной среде. Допускается использование только

физических методов диспергирования (встряхивание, перемешивание, обработка ультразвуком).

Использование детергентов и органических растворителœей для диспергирования наночастиц в общем

случае не допускается.

4.8.1.8. В случае если наноматериалы находятся в растворителœе или на носителœе или растворитель или

носитель необходим для получения их дисперсий, то в отдельном ряде тестов проводятся

исследования цитотоксичности самого растворителя (носителя), который также добавляется в среду

культивирования в той же дозировке, что и в составе исследуемого образца наноматериала.

4.8.2. Ход тестирования

4.8.2.1. Общая продолжительность воздействия наноматерналов на клетки-мишени варьирует в

зависимости от вида клеток-мишеней и типа экспериментов и может составлять от 24 часов до 14

дней (для непролиферирующих и слабопролиферирующих клеточных культур), при этом учитывается

жизнеспособность клеток, изменение их пролиферативной способности и функциональной

активности.

4.8.2.1. Подбор концентраций наноматериала, вносимого в культуру, осуществляется на основе

предварительной информации производителя. Используемый диапазон концентраций (доз)

тестируемого материала должен перекрывать не менее трех порядков величины, начиная от

недействующих концентраций и до концентраций, вызывающих стойкие изменения в клетках и (или)

их гибель.

4.8.2.2. В случае если из-за низкой цитотоксичности испытуемого наноматериала не детектируется

гибель клеток или снижение их жизнеспособности и функциональной активности, то в отчете о

тестировании указывается максимальная и минимальная дозы наноматериала, которые были

добавлены в среду культивирования.


Читайте также


  • - Методы in vitro.

    Партеногенез in vitro – включает получение гаплоидов из гибридного зародыша, у которого из-за несовместимости хромосом (геномов) родителей утрачивается один из геномов. Ядра не сливаются в гибридной клетке, одно из ядер распадается. Яйцеклетка делится с образованием... [читать подробенее]


  • - МЕТОДЫ IN VITRO В СЕЛЕКЦИИ РАСТЕНИЙ

    1. Вспомогательные методы in vitro в селекции растений. К вспомогательным методам относят1) искусственное оплодотворение в условиях in vitro(преодоление прогамной несовместимости); 2)преодоление постгамной несовместимости; 3)методы клонального размножения растений; 4) методы... [читать подробенее]


  • - Запліднення in vitro

    До середини 70-х років ХХ століття склалися усі передумови для практичної реалізації ідеї лікування безплідності методом ЗІВ: розуміння ендокринних механізмів регуляції репродуктивного циклу, процесів дозрівання яйцеклітини та імплантації ембріонів, механізмів впливу... [читать подробенее]


  • - Методы генетического конструирования in vitro

    Включают работу с рекомбинантной ДНК. Суть этой технологии заключается в воссоединении фрагментов ДНК in vitro, т.е. в «пробирке» с последующим введением новых («рекомбинантных») генетических структур в живую клетку. Т.к. с химической точки зрения ДНК всех организмов... [читать подробенее]


  • - Характеристика клітин, що культивуються in vitro

    Клітини того самого типу в тканині взаємодіють один з одним і погоджують швидкість розмноження, щоб підтримувати належну щільність популяції. «Соціальний» контроль такого роду чітко проявляється при реакціях на ушкодження. Наприклад, коли ушкоджений епітелій, клітини... [читать подробенее]


  • - Фактори, що впливають на морфогенез in vitro

    Індукуючий вплив можуть надавати різні фактори: гормони, продукти життєдіяльності сусідніх клітин, інших тканин, електрофізіологічні сигнали і т.д. Детермінація – придбання клітиною стану готовності до реалізації визначених спадкових властивостей. Детермінація... [читать подробенее]


  • - Выращивание ЭСК in vitro

    Для исследователей ЭСК - это пособие для расшифровки работы генома (особенно в период раннего эмбриогенеза и органогенеза). Необходимо напомнить, что изучение эмбриогенеза человека ограничено по биоэтическим соображениям. Постимплантационный эмбриогенез млекопитающих... [читать подробенее]


  • - In vitro

    Показаниям, после определения чувствительности Вялотекущем процессе Постельный режим ЛЕЧЕНИЕ ОСТРОГО РЕВМАТИЗМА ЛЕЧЕНИЕ Главная задача лечения после установления диагноза ревматической лихорадки /острого ревматизма/ - вылечить воспалительный... [читать подробенее]


  • - Методи радіонуклідної діагностикиполіляють на 2 групи: дослідження в цілому організмі (in vivo) і в біологічних середовищах|середі| (in vitro).

    Прилади для радіонуклідних досліджень Клінічні радіодіагностичні дослідження выполняютисполняют з помощьюпосредством спеціальних приладів. По медико-функціональному призначенню виділяють 3 групи радіодіагностичних приладів. I. Радіометри для вимірювання|виміру|... [читать подробенее]